作业帮关于鱼消化酶的活力大小测定的实验方案主要就是淀粉酶和蛋白酶的活力大小测定,
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/18 13:26:07
关于鱼消化酶的活力大小测定的实验方案主要就是淀粉酶和蛋白酶的活力大小测定,
关于鱼消化酶的活力大小测定的实验方案
主要就是淀粉酶和蛋白酶的活力大小测定,
关于鱼消化酶的活力大小测定的实验方案主要就是淀粉酶和蛋白酶的活力大小测定,
我这有关于淀粉酶活力的测定,看看有没有用啊
[目的与原理]
掌握淀粉酶活力的测定方法,测定水产经济动物的主要消化器官肝胰脏、胃、肠内的淀粉酶活力.
淀粉酶催化淀粉分子中葡萄糖苷键水解,产生葡萄糖、麦芽糖等.在基质充分的条件下,反应后加入的碘液与未被水解的淀粉结合成蓝色复合物,其蓝色深浅与未经酶促反应的空白管比较其吸光度,从而推算出淀粉酶的活力单位.
[试剂与器材]
试剂：
1、0.04%可溶性淀粉
精确称取可溶性淀粉0.20g,置于20ml烧杯内,加入蒸馏水约5ml,摇匀使成淀粉混悬液,另称取无水磷酸二氢钠13.3g及苯甲酸4.3g,共置于500ml烧杯内,加入蒸馏水约250ml,煮沸后,将淀粉混悬液倒入此烧杯内,并用蒸馏水洗涤装淀粉混悬液的烧杯数次,洗涤亦倒入此烧杯内.继续煮沸1分钟,冷却至室温后倒入500ml容量瓶中,并用蒸馏水稀释至500ml刻度.此淀粉液pH应为7.0±0.1,在室温下保存2―3个月.
2、0.1N碘贮存液：精确称取碘酸钾(KIO3) 3.567g及碘化钾（KI）45g置于1L容量瓶内,加入蒸馏水约800ml,然后缓慢加入浓盐酸9ml,摇匀后用蒸馏水稀释至1L刻度,置冰箱内备用.
3、0.01N碘应用液：取0.1N碘贮存液50ml,用蒸馏水稀释至500ml,盛于棕色瓶中置冰箱内约保存1个月.
材料：
新鲜鱼、虾、贝的肝胰脏、胃、肠标本.
器材：
分光光度计、电子天平、离心机、pH测定仪,恒温水箱、匀浆器、剪子、镊子、冰块、50ml比色管若干、移液管若干,500ml容量瓶,烧杯.
[实验步骤]
1、酶提取液的制备（见实验蛋白酶活力的测定）
2、淀粉酶活力的测定
取50ml刻度比色管二只,标明为对照管,测定管.
对照管
测定管
0.04％可溶性淀粉
5.0ml
5.0ml
将两管在37℃水浴中预热2—5分钟
酶液
—
0.1ml
测定管混匀后,再置37℃水浴中反应7.5分钟
0.01N碘应用液
5.0ml
5.0ml
用蒸馏水稀释至50ml,立即混匀.用660nm或红色滤光板进行比色,以蒸馏水校正光密度0点,读取对照管和测定管光密度读数.
3、计算
淀粉酶活力单位定义：在370C、30min内,100ml酶液中的淀粉酶能完全水解淀粉10mg称为一个淀粉酶活力单位.
淀粉酶活力单位/100ml＝（对照管光密度—测定管光密度）/对照管光密度×2/10×30/7.5×100/0.1=（对照管光密度—测定管光密度）/对照管光密度×800
[方法评估]
测定淀粉酶的方法有很多种,大致可分为两类：即测定底物（淀粉）的减少量和测定产物（如还原性糖）的生成量.本实验采用前者的淀粉—碘比色法.
[应用意义]
分析淀粉酶的活力有助于了解水产动物对食物中淀粉的消化能力,由于鱼虾等水产动物种类与大小的差异和所提供食物品质的不同,以及动物所处生活环境的变化,各种水产动物对食物的消化吸收有明显的差别.认识鱼虾消化酶变化特性,为研究水产种类饲料配伍提供科学依据
[注意事项]
1、0.04%可溶性淀粉溶液5ml内含淀粉量为2mg,在本法条件下,当2mg淀粉完全水解时相当于800淀粉酶单位／100ml（即：2/10 × 30/7.5 × 100/0.1 = 800）.
2、对照管内含淀粉2mg,由于淀粉溶液比较稳定,故对照管在固定比色计上的光密度读数并不改变,因而在测定中不必每次作对照管.
3、当淀粉酶接近800单位时,由于淀粉已几乎完全被水解,故加入碘液后也不再显蓝色,因此淀粉酶单位较高时（接近600单位）宜将标本稀释（2～5倍）后重新测定,并将测定结果乘以稀释倍数.
4、如淀粉溶液出现混浊或絮状物,表示淀粉溶液污染或变质,不能再用.
5、唾液内含有大量的淀粉酶,故即使是唾液的飞沫污染,也能使测定结果显著偏高.