医药学论文：幽门螺杆菌工程疫苗研究进展[1]

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　　 幽门螺杆菌(HelicobacterPylori，Hp)是慢性胃炎、消化性溃疡及胃肠道淋巳瘤的主要致病因素，并与胃癌发生密切相关，WHO将其列为第一级致癌物质[1]，流行病学调查表明，我国是胃癌癌的高发区及Hp高感染区(21％～93％)，已对人民健康造成重大危害，尽管抗生素治疗在HP相关性疾病治疗方面取得了较大进展。但其毒副作用明显，疗效不稳定，无法解决其复发问题，人类与病原微生物的长期斗争历史表明，有效控制和彻底消灭某种传染病的最佳途径是疫苗接种，Hp疫苗接种将是预防Hp感染，降低Hp相关性疾病发病率的最佳选择[2]。1995年费城会议上Rapuoli指出开发Hp疫苗需要至关重要的三种成分：①必须现能干扰粘附和毒性且存在于所有菌株的保护性抗原。如尿素酶(Ure)、热休克蛋白60(Hsp60)、粘附素等；②临床前试验需要能模拟感染和疾病的动物模型，一种新的Hp感染小鼠需要新鲜的临床分离株来感染小鼠，这一模型能重复人体疾病的诸多临床表现，如上皮细胞损害和炎症等；③需要有适用人体的粘膜佐剂，比较肯定的有霍乱毒素(choleratoxin,CT)B亚单位(CT-B)、大肠杆菌热敏毒素(heatlabiletoxinofenterotoxigemicE-coli，LT)B亚单位(LT-B)等．1抗原基因的选择研究疫苗的首要任务便是寻找免疫原，Lazowskaetal[3,4]在HP蛋白免疫原的寻找方面作了较为出色的工作，最初应用全菌抗原和膜佐剂口服免疫Hp感染的小鼠，成功诱导小鼠保护性免疫反应，但全菌抗原成分复杂，副反应多，研制Hp亚单位疫苗成为必然．HpUre基因组，由A，B，C，D四个亚基基因组成，基因结构已清楚，其中A，C，D亚基免疫原性差，其免疫保护作用十分微弱，仅有UreB亚基能产生保护性免疫，是疫苗和诊断用抗原的主要候选基因之一[5]；CagA基因较大，编码分子量94KD的细胞毒性相关蛋白，是Hp的主要致病因子．因此研究UreB或(和)CagA相关的疫苗将能有效预防致病Hp的感染和发病，Ure作为候选菌苗有许多优点[6，7]：它在菌株中含量丰富(占Hp可溶性蛋白总量的6％)，分布在细菌表面，广泛表达和高度保守；其大分子量和颗粒状结构也更有利于粘膜免疫接种。Pappoetal用纯化的Helicobacterfelis(Hf)UreB亚单位和CT口服免疫小鼠后可抗Hf定植，而UreA亚单位则无保护作用，UreB亚互单位和LT口服免疫小鼠，同样产生抗Hf感染保护力，重组的Ure和LT口服、鼻腔、直肠免疫同样能够诱导小鼠产生免疫保护力[8]，Ure抗体被动免疫小鼠后也能预防Hf感染的事实，间接说明Ure诱导产生的免疫保护力是体液免疫应答介导的，螺杆菌属的Ure同源性非常高，HpUreB亚单位和佐剂CT口服免疫小鼠可抗Hf感染的事实，说明螺杆菌属的Ure存在交叉性表位，免疫后可引起交叉性保护，目前在小鼠模型上已证实多种Hp抗原包括VacA，Ure，CagA，过氧化氢酶、HpGroES类蛋白等。都可诱导小鼠产生免疫保护力。疫苗能否清除已有的感染？Doidge采用Hp超声裂解物和重组UreB亚单位，结合CT口服免疫慢性Hp感染小鼠，结果证实口服免疫兼具预防和治疗双重作用，Doidge在Hm(Hmustelac)感染的雪貂中也发现类似结果．Ghiaraetal[9]研究了Hp相关抗原作为疫苗治疗慢性Hp感染效果，同时也试验大肠杆菌突变脱毒肠毒素(LTK63)作为粘膜佐剂的可能性，结果表明不管是Hp超声裂解物或者重组蛋白VacA和CagA，与UTK63一起免疫，都成功地清除了小鼠体内已有的Hp，并且免疫3mo后仍无感染，Marchettietal[10]实验了LT，LTK63佐剂与全菌、内源性VacA，Ure，CagA及重组VacA，CagA的免疫保护作用，发现都可激发小鼠产生免疫保护[11]．2关于佐剂粘膜免疫需要强的佐剂以提高抗原的免疫原性，粘膜佐剂可刺激Th2型粘膜免疫反应．未来的Hp疫苗必须辅以能有效诱导粘膜免疫的佐剂，活化Th2细胞免疫途径，才能产生大量的slgA，才能克服Hp抗原性弱的问题．CT和LT是目前研究最为深入的粘膜免疫佐剂，它们都具有较强的粘膜免疫原性和粘膜佐剂效应，与不相关可溶性蛋白抗原同时口服免疫机体，能消除机体对这些免疫蛋白的耐受性，诱导机体产生针对CT及其免疫蛋白的长期免疫记忆．它们都能促进抗原递呈细胞的抗原呈递，选择性诱导抗原特异性Th2细胞应答，促进上皮内淋巴细胞的有丝分裂和B细胞种型分化，但由于CT口服时在某些品系小鼠诱生超敏反应，而改用CT-B单位即可避免，故有人认为CT-B是至今为止最为有效最为安全的粘膜免疫佐剂之一，目前医药学论文