为什么我做定量PCR无CT值（信号）出现?怎么解决呢

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/06 02:28:41

为什么我做定量PCR无CT值（信号）出现?怎么解决呢
为什么我做定量PCR无CT值（信号）出现?怎么解决呢

为什么我做定量PCR无CT值（信号）出现?怎么解决呢
博凌科为-为你1.反应循环数不够.一般都要在35个循环以上,可根据实验情况增加循环（如至45cycles）,但高于45个循环会增加过多的背景信号.2.检测荧光信号的步骤有误.一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号.3.引物或探针降解.可通过PAGE电泳检测其完整性.4.引物或探针的设计,如探针高于引物的温度不够,造成探针未杂交上而产物已延伸的情况.5.模板量不足.对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起.6.模板降解.避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况.

没有扩增可见于：
1. 基因没有表达，所以肯定没有扩增
2. 表达量很低，增加循环数，可出现
3. 基因有表达，但是引物有问题，不能扩增，建议做一半PCR跑胶看结果
4. PCR的试剂有问题，加做阳性对照。
5. 样本反复冻融，都降解了

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