作业帮RT-PCR一步法与两步法有什么不同?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/08 15:43:35
RT-PCR一步法与两步法有什么不同?
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博凌科为-为你两步法RT-PCR比较 常见,在使用一个样品检测多个mRNA时比较有用.然而一步法RT-PCR具有其他优点.一步法RT-PCR在处理大量样品时易于操作,有助于减少残余污 染,因为在cDNA合成和扩增之间不需要打开管盖.一步法可以得到更高的灵敏度,最低可以达到0.1pg总RNA,这是因为整个cDNA样品都被扩增.对于成功的一步法RT-PCR,一般使用反义的基因特异性引物起始cDNA合成.一步法 两步法 起始第一链cDNA合成使用：起始第一链合成使用 Oligo(dT) GSP引物 随机六聚体 GSP引物 优点 优点 灵活 方便 引物选择 扩增酶同逆转录酶预先混合 扩增酶的选择 转管步骤少,减少污染可能性 困难RT-PCR的优化能力 高灵敏度 同 Platinum酶结合提高特异性 适用于大量样品分析 同PlatinumPfxTaqDNA聚合酶结合提高忠实性 适用于定量PCR 适用于在单个样品中检测几个mRNA
简单点回答吧，RT-PCR包括2步，1、mRNA逆转录为cDNA；2、cDNA做模版的PCR。
合而为一就是一步法，分开就是两步法。
逆转录为cDNA后更容易保存，使用效果更稳定；
一步法更快捷，但重复性不好，搞科研不推荐
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