转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k

转化后PCR无条带把连接产物连接到T载体之后转化大肠杆菌,用连接产物片段上有而T载体上没有的Kana抗性进行筛选,有转化子长出.培养转化子后PCR,却扩增不出目的条带（即之前的连接产物,约3k PCR纯化产物与T载体连接后放置两天影响转化吗 连接到T载体上面后,做双酶切,条带不正确,目的片段变大是什么原因 PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提 我的目的片段连载体后,挑单克隆摇菌,用菌液PCR,没有条带. 菌液PCR不同条带将已扩增出来的993bp的cDNA与T载体连接,之后DH5α转化,涂平板,挑克隆!菌液PCR为何一组检测到750bp有条带,一组1000bp处有条带两种结果!1000bp条带处是我预期的条带!麻烦大师留下相 PCR产物纯化后,连接载体PGMT,转化如DH5α后为何不能直接测序,还要再酶切和提取质粒呢? TA克隆全是阴性我把1400bp的片段连接到宝生物的PMD18-T载体上,转化后,全是白斑,但是挑了二十个全是空载体, 我构建的穿梭载体,连接好后进行双酶切和PCR两个途径的检测,结果酶切没有条带显示,而PCR确有目的条带!这是为神马?只连这个穿梭载体就已经连了两个月了,我快崩溃了! 我PCR产物大小141bp,纯化后,连接到pGEM-T载体克隆,使用M13通用引物,扩增片段长度是多少?我想知道假如用pGEM-T通用引物M13F 5'TGTAAAACGACGGCCAGT3'和M13 RV 5'CAGGAAACAGCTATGACC3'引物进行菌液PCR,扩增出的片段 青霉素抗性基因,切割后在DNA连接酶的作用下与载体连接产生3种连接产物,目的基因-目的基因连接物;目的基因-载体连接物;载体-载体连接物.将这些产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转 在含卡那的培养板和培养基中都长,菌液PCR也有,就是提不出来质粒用pET30a构建原核表达载体,连接产物转化,长了满板,条单克隆到含卡那的液体培养基中,长了,菌液PCR有条带,但提质粒提不出来 T载体连接问题现在在做5,RACE.扩增出目的条带后胶回收,然后用特异性引物去嵌套验证,结果也有目的大小的条带扩增出来,这应该可以说明胶回收的目的片段是正确的.但是用T载体连接后转化到 环化的PUCmT载体用Ecor1酶切后电泳检测为什么还是两条带我要把一个65kb的野生大质粒酶切后进行连接,然后将连到载体上的质粒片断送测序以得到质粒全序列,现有的PUCmT是连接PCR产物用的是线 PCR扩增产物电泳后显示的条带说明什么? 为什么篮斑做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢我用蓝白斑做的 T载体和目的片段连,为什么篮斑的 做PCR菌液鉴定也能P出来条带呢? 转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体? 英语翻译本文通过PCR、转化、提质粒、酶切、连主要接、纯化等步骤构建了质粒pET28a-NULP1.先通过PCR扩增出了nulp1,并将nulp1连接入pMD18-T载体酶切检测并测序,得到正确的nulp1,再将nulp1连接到pET-28