没互补的单链引物接头怎样形成人工接头?具体的操作方法,变性温度.

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/27 15:27:56

没互补的单链引物接头怎样形成人工接头?具体的操作方法,变性温度.
没互补的单链引物接头怎样形成人工接头?具体的操作方法,变性温度.

没互补的单链引物接头怎样形成人工接头?具体的操作方法,变性温度.
粘性末端连接
同一限制酶切割位点连接 由同一限制性核酸内切酶切割的不同DNA片段具有完全相同的末端.只要酶切割DNA后产生单链突变（5'突出及3'突出）的粘性末端,同时酶切位点附近的DNA序列不影响连接,那么,当这样的两个DNA片段一起退火时,粘性末端单链间进行碱基配对,然后在DNA连接酶催化作用下形成共价结合的重组DNA分子.
不同限制性内切酶位点连接 由两种不同的限制性核酸内切酶切割的DNA片段,具有相同类型的粘性末端,即配伍末端,也可以进行粘性末端连接.例如MboⅠ(▼GATC)和BamHⅠ(G▼GATCC)切割DNA后 均可产生5'突出的GATC粘性末端,彼此可互相连接.
平端连接
DNA连接酶可催化相同和不同限制性核酸内切酶切割的平端之间的连接.原则上讲,限制酶切割DNA后产生的平端也属配伍末端,可彼此相互连接；若产生的粘性末端经特殊酶处理,使单链突出处被补齐或削平,变为平端,也可实行平端连接.
同聚物加尾连接
同聚物加尾连接是利用同聚物序列,如多聚A与多聚T之间的退火作用完成连接.在末端转移酶(terminal transferase)作用下,在DNA片段端制造出粘性末端,而后进行粘性末端连接.这是一种人工提高连接效率的方法,也属于粘性末端连接的一种特殊形式.
人工接头连接
对平端DNA片段或载体DNA,可在连接前将磷酸化的接头(linker)或适当分子连到平端,使产生新的限制性内切酶位点.再用识别新位点的限制性内切酶切除接头的远端,产生粘性末端.

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