SDS-PAGE 5Xloading buffer 注意,问的不是配方,我想配点儿5X的loading buffer,分子克隆上写着10%SDS,我的配制思路是（200ml）25ml1M Tris pH6.8,20gSDS,及1g溴酚蓝配制到100mL,然后再加100ml甘油,但是问题是20gSDS要

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/05 05:15:54

SDS-PAGE 5Xloading buffer 注意,问的不是配方,我想配点儿5X的loading buffer,分子克隆上写着10%SDS,我的配制思路是（200ml）25ml1M Tris pH6.8,20gSDS,及1g溴酚蓝配制到100mL,然后再加100ml甘油,但是问题是20gSDS要
SDS-PAGE 5Xloading buffer 注意,问的不是配方,
我想配点儿5X的loading buffer,分子克隆上写着10%SDS,我的配制思路是（200ml）25ml1M Tris pH6.8,20gSDS,及1g溴酚蓝配制到100mL,然后再加100ml甘油,但是问题是20gSDS要溶解到那么小体积的水中实在是困难,我把SDS溶解（其实大部分是不溶的）放到65度烘箱里,放大概几个小时,SDS倒是溶了,但是变得非常黏稠,摇都摇不动的那种,跟果冻似的,请问这样配法是不是正确,如果不正确应该怎样配,请配过的大虾教教我,最好有详细配制流程.
5X的loading buffer已经配制成功，虽然SDS很难溶，但还是溶了。因为5X的上样量可以大一些，做western的时候比较有用，2X的我有配好的，呵呵

SDS-PAGE 5Xloading buffer 注意,问的不是配方,我想配点儿5X的loading buffer,分子克隆上写着10%SDS,我的配制思路是（200ml）25ml1M Tris pH6.8,20gSDS,及1g溴酚蓝配制到100mL,然后再加100ml甘油,但是问题是20gSDS要
我想说以下几点：
1.SDS-PAGE loading buffer一般配成2X 的,5X loading buffer确实过于粘稠,且SDS在低温下难溶于水,这就导致你配的buffer“摇都摇不动”了
2.不知你为何要配那么多loading buffer（况且是5X的）,这些东西都是用量很少的,建议你少配些,比如……10 ml?
3.以下就以2X loading buffer（配制10 ml）为例说明配制步骤
首先配制1 mol/L Tris-HCl(pH6.8),10%SDS溶液.
然后称取0.02 g溴酚蓝于小烧杯里,依次加入1 mol/L Tris-HCl(pH6.8) 1ml,10%SDS溶液4ml,甘油2ml,去离子水2ml,2-巯基乙醇1ml.混匀,分装成小份,-20度保存.用时溶解,与样品1:1混合上样.
需要说明的是,2-巯基乙醇是还原剂,也可用前加入,以防失效.

建议你配好的5x溶液在热的时候分装到小管，使用时只需加热小管就不是很粘稠了

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