ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗?

ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗? ISSR-PCR的退火温度怎么设计? ISSR问题,万分感激!这个是成分分别加的,应该没有问题,之前做普通PCR都是这样的.今天我又换MIX,只加模板和引物,用五个退火温度还是一样,换了其他两种引物还是一片亮带,没有单一条带.这个 做ISSR 的PCR条件优化我想根据这几个做个正交试验 模板浓度,dNTP,引物浓度,taq酶,Mg离子浓度是不是太多了……?退火温度我用梯度PCR基本弄好了,总体积25μl,模板1μl,引物1μl,其它用的是mix跑的, 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? ssr引物筛选我是做分子标记的,现在遇到一些问题?1、根据引物报告单上的退火温度,上游和下游温度不一样怎么选择?2、我有600对引物,3个亲本,现在要筛一遍,用96孔的PCR板P的时候,每一对退火 ISSR－PCR退火温度如何设定有些引物说明书上的Tm值只有30～40度,通过公式2（A＋T）＋4（G＋C）－2计算的温度也只有30多度,我该如何设定退火温度? 关于细菌基因组PCR的问题向做过细菌PCR的请教：体系一般都是多少,退火温度呢我们做过退火温度有48度、43度、56度,引物是通用引物1492R和27F,模板和引物都没问题,是不是引物和模板不匹配,10 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火 用相同的引物做PCR和qPCR的退火温度是一样的吗?我看文献里的,好像不一样,为什么? pcr引物退火温度55度时不行,58度可以,为什么在做PCR时,引物用55度的退火温度扩不出来,而用58度却扩出来了,为什么 PCR过程中引物的碱基数量与种类 和 退火温度有什么关系?理由 PCR引物的发卡结构和二聚体可以通过提高退火温度克服吗 PCR引物的发卡结构和二聚体可以通过提高退火温度克服吗 【跪求】我的PCR体系应该怎么设定?退火温度?我做一种真菌的pcr,引物序列左：aatcgacccgtttccgcctt, 右：gttagattgaccgcgattcc,生工合成单给的退火温度分别是59.85和57.8我的25微升体 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度!文献上62摄氏度,我感觉有点不对劲啊!给出PCR退火温度的计算的方法！谢谢·· 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因?