作业帮用于观察线粒体的荧光染色剂用在激光扫描共焦显微镜上
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/05/06 00:01:43
用于观察线粒体的荧光染色剂用在激光扫描共焦显微镜上
用于观察线粒体的荧光染色剂
用在激光扫描共焦显微镜上
用于观察线粒体的荧光染色剂用在激光扫描共焦显微镜上
健那绿（Janus green B）染液
健那绿（Janus green B）染液是专一性染线粒体的活细胞染料,可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色,而细胞质接近无色.
健那绿
罗丹明123染色检测线粒体膜电位
外观：红棕色粉末
化学名：Rh123 罗丹明123
别名： Rhodamine 123; Rh123
分子式：C21H17CLN2O3
分子量：380.82
配制：罗丹明123粉剂用甲醇配成1mg/mlde 储备液，染色时用DPBS缓冲液将其稀释为所需浓度
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罗丹明123染色检测线粒体膜电位
外观：红棕色粉末
化学名：Rh123 罗丹明123
别名： Rhodamine 123; Rh123
分子式：C21H17CLN2O3
分子量：380.82
配制：罗丹明123粉剂用甲醇配成1mg/mlde 储备液，染色时用DPBS缓冲液将其稀释为所需浓度
保存：冰箱-20度避光
一、检测原理：
罗丹明123（Rhodamine 123）是一种可透过细胞膜的阳离子荧光染料，是一种线粒体跨膜电位的指示剂。其在正常细胞中能够依赖线粒体跨膜电位进入线粒体基质,荧光强度减弱或消失。而在凋亡发生时，线粒体膜完整性破坏，线粒体膜通透性转运孔开放，引起线粒体跨膜电位(ΔΨm) 的崩溃, Rh123 重新释放出线粒体, 从而发出强黄绿色荧光，可用荧光显微镜、荧光光度计或流式细胞仪检测，通过荧光信号的强弱来检测线粒体膜电位的变化和凋亡的发生，可用于培养的细胞或从组织中提取出的线粒体的膜电位检测。
二、 使用方法：
1．细胞染色及分析
（1）培养细胞1×106/mL重悬于培养基中；
（2）加入罗丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL （根椐细胞种类不同而浓度不同，一般3～10 μg/mL）；
（3）37℃，5% CO2细胞培养箱孵育1～30 min（根椐细胞种类不同而不同，一般10 min）；
（4）离心以培养基洗细胞两次；
2． 组织提取的线粒体染色及分析
（1）按常规方法提取的线粒体，用适量的1×Assays Buffer（将5×Assays Buffer 用水稀释5倍）重悬；
（2）常规方法进行蛋白含量测定后，用1×Assays Buffer调配成3mg/mL的线粒体溶液；
（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL线粒体溶液；
（4）加入适量待测化合物（同时设空白对照组），250C保温min；
（5）加入罗丹明123染液10 μL；
（6）荧光光度计检测：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下测定，激发波长488～505nm，发射波长530nm，连续记录从0 min～30 min内荧光强度的变化。
三、注意事项
1、操作时需戴手套
2、罗丹明123为通透性染料，可以自由进入细胞
3、孵育时，必须避免光照
4、使用时，避免污染母液
5、染色完成后，即刻进行荧光检测分析
收起