试述高压蒸汽灭菌和常压灭菌及其关键环节

试述高压蒸汽灭菌和常压灭菌及其关键环节
试述高压蒸汽灭菌和常压灭菌及其关键环节

试述高压蒸汽灭菌和常压灭菌及其关键环节
高压灭菌的原理是：在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加.在0.1MPa的压力下,锅内温度达121℃.在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢.
注意:完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能彻底.高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌彻底.常用方法是：关闭放气阀,通电后,待压力上升到0.05MPa时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀.关阀再通电后,压力表上升达到0.1MPa时,开始计时,维持压力0.0.15MPa 20分钟.
到达保压时间后,即可切断电源,在压力降到0.5MPa,可缓慢放出蒸气,应注意不要使压力降低太快,以致引起激烈的减压沸腾,使容器中的液体四溢.当压力降到零后,才能开盖,取出培养基,摆在平台上,以待冷凝.不可久不放气,引起培养基成分变化,以至培养基无法摆斜面 .一旦放置过久,由于锅炉内有负压,盖子打不开,只要将放气阀打开,大气压入,内外压力平衡,盖子便易打开了.
对高压灭菌后不变质的物品,如无菌水、栽培介质、接种用具,可以延长灭菌时间或提高压力.而培养基要严格遵守保压时间,既要保压彻底,又要防止培养基中的成分变质或效力降低,不能随意延长时间.
常压湿热灭菌法
通过热蒸汽或沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法.湿热穿透力强,灭菌效果较干热好.
①煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是100℃,一般处理30~60min可杀死细菌繁殖体,但不能完全杀灭芽孢.此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品.
②低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用60~80℃加热（或煮沸）1h,然后置20~25
℃保存24h（或常温过夜）,使其中残存的芽孢萌发成繁殖体,再用以上条件灭菌,如此反复三次.本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品,但很费时.
常压灭菌还可以是射线灭菌,化学灭菌,巴氏消毒等方法.
化学灭菌法 利用化学试剂形成的气体来杀灭微生物的方法.常用的灭菌剂为环氧乙烷（又称氧化乙烯）.环氧乙烷是广谱杀菌剂,能杀灭细菌、芽孢和多种病毒,还能杀死昆虫及虫卵.但由于环氧乙烷易燃易爆且有毒（有致变异性）,用于药品方面极有限,多用于医疗器械、塑料制品等灭菌.（不能用于橡胶和乳胶手套,能将其溶解.）
4）滤过除菌法 利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理,除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方法.过滤法一般只能除菌,不能除去支原体和病毒.
过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关.
滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为0.22μm.由于各厂家生产的相同规格的滤膜质量并不一致,为了保证除菌效果,在使用前后应检查滤器的完好性（如压力维持试验或起泡点试验）.
一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定,一般不应超过8小时.
5）辐射灭菌法 辐射有两种类型：一种是电磁波辐射,如紫外线、红外线、微波；一种是电离辐射,如可引起被照射物电离的X射线、γ射线.
①紫外线：紫外光波长在136~390nm之间,其中260nm左右能破坏核酸,杀菌作用最强.另外,空气中的氧受紫外线照射后,可微量转变为臭氧共同起杀菌作用.紫外线消毒的效果与光源的功率、光源与被照射物的距离、照射时间、温度和湿度等因素有关.我国规定紫外灯照射强度在距离1m处不低于70μW/cm2（以紫外线测强仪测定）.在操作面上要求强度达40μW/cm2以上.一般每10m2装30W灯管1支,工作前开30~60min.
紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低.国产紫外灯的平均寿命（点到70%额定功率的时间）一般为2000h,超过平均寿命时,就达不到预期效果,必须更换.
紫外线的穿透力很弱,不能穿透一般包装材料,如玻璃、塑料薄膜、纸等.玻璃能强烈吸收小于350nm的紫外线,石英玻璃能吸收小于200nm的紫外线.因此,它主要用于空气和物体表面消毒,特制的紫外灯装置也可用于水的消毒.
紫外线对眼、皮肤有损坏,照射过程中产生的臭氧对眼、鼻腔有刺激,臭氧过多时使人头晕、胸闷、血压下降.
②红外线：通过加热碳化硅板产生的辐射热能,由空气传导加热灭菌.如红外线烤箱,温度可达180℃左右.热效应特点是由表及里.
③微波：微波灭菌主要是因其热效应.微波加热升温快,温度高且均匀,杀菌作用强.热效应特点是由里及表.不同性质的物品吸收微波的能力不同,其热效应和消毒效果也不同.
微波有一定穿透力,但不强.微波对人体有害,要注意防护.
④60Co灭菌：放射性同位素60Co（或137Cs）衰变时可放射出γ射线,γ射线的能量高、穿透力强,可使细胞内各种活性物质发生化学变化,从而使细菌损伤或死亡.
经60Co辐射灭菌的物品温度升高很少,一般仅约5℃,故又称“冷灭菌”.
60Co辐射存在两个方面的安全问题：一是辐射的直接作用.γ射线对人体细胞同样有害；二是经过辐射的食品、药品的安全性.1984年美国农业部食品安全实验室用辐射处理的鸡肉喂饲小鼠,发现患睾丸肿瘤增加,包括加重癌病损害.因此60Co辐射用于食品和药品都应经过安全试验,进行科学的、全面的评价,高剂量的辐射药品更应慎重.