上下游引物退火温度分别为47、49℃,如何设置温度梯度PCR最合适引物退火温度低（上下游分别为47、49）,P不出目的条带

上下游引物退火温度分别为47、49℃,如何设置温度梯度PCR最合适引物退火温度低（上下游分别为47、49）,P不出目的条带 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火 假设我有一个引物,上游引物Tm为65.2℃,下游为64.6℃.请问怎样设计退火温度梯度, 一般引物长度为18~30碱基,这里的长度指的是上下游序列（P+和P-）的总长度吗,P+和P-的Tm不同,退火温度怎一般引物长度为18~30碱基,这里的长度指的是上、下游序列（P+和P-）的总长度吗,P+和P-的T 设计引物的时候上下游引物的退火温度分别是56.9和56摄氏度,PCR时退火温度应选多少度!文献上62摄氏度,我感觉有点不对劲啊!给出PCR退火温度的计算的方法！谢谢·· 关于引物的退火温度?为什么用公式计算的引物退火温度和试剂公司送来的合成报告单上的退火温度不一致? ssr引物筛选我是做分子标记的,现在遇到一些问题?1、根据引物报告单上的退火温度,上游和下游温度不一样怎么选择?2、我有600对引物,3个亲本,现在要筛一遍,用96孔的PCR板P的时候,每一对退火 引物ITSR/F退火温度是多少?急 我的引物设计有30个碱基,tm值分别为88和84,是不是太高了?那退火温度怎么设定啊? RT-PCR怎么都没法克隆出目的片段我用的上下游引物tm值相差较大,解决办法是先用低的退火温度跑5个循环,然后再用高退火温度的跑25个循环.试剂盒使用的是takara 一步法RT-PCR KIT请问各位针对这 pcr退火温度太高有什么缺点pcr的引物如果很长,导致tm值很高,这样扩增的退火温度就会很高,如达到65-70℃,会不会导致模板正反链的复性,从而导致扩增效率降低? 求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? 如何用PCR技术检测酵母菌?如何选择引物?变性、退火、延伸的温度设置为多少比较合适,Buffer?如何用PCR技术检测酵母菌?如何选择引物?变性、退火、延伸的温度设置为多少比较合适,Buffer具体规 我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度? 引物退火温度是53度,如何设置两个梯度的退火温度 引物退火温度差别十度以上怎么办? 一些通用引物的退火温度?比如m13 知道引物如何求退火温度和循环次数