作业帮从酵母中克隆一基因,发现其蛋白产物与细胞周期的调控有关.为研究其在人细胞中同源的作用请设计研究方案有助于回答者给出准确的答案
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/30 08:51:37
从酵母中克隆一基因,发现其蛋白产物与细胞周期的调控有关.为研究其在人细胞中同源的作用请设计研究方案有助于回答者给出准确的答案
从酵母中克隆一基因,发现其蛋白产物与细胞周期的调控有关.为研究其在人细胞中同源的作用请设计研究方案
有助于回答者给出准确的答案
从酵母中克隆一基因,发现其蛋白产物与细胞周期的调控有关.为研究其在人细胞中同源的作用请设计研究方案有助于回答者给出准确的答案
要先给你的基因测序,或者知道找到它在ncbi上的号,然后找人的同源序列,或者其实一般不能用人做吧,都用小鼠的,那你就找小鼠的,然后参照着之前的步骤或者找相关文献来参照着做,这种东西比较难的跟你说,因为高等生物的基因作用往往不是单独的,而引起一种表象改变的因素很多时候也不是只有一个~
第一 把基因的名称及物种来源在NCBI数据库里查找到其GENEBANK的相关资料，包括CDS,mRNA序列，内含子数量及位置，外显子数量及位置，根据这些信息设计引物。提取酵母RNA，通过反转录得到cDNA，然后用设计好的引物进行PCR扩增，得到目的基因CDS全长。设计引物的时候要考虑加进去酶切位点，为下一步的克隆做好准备
第二 选择一个适合真核表达的载体，如PCMV之类的。然后将第一步中得...
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第一 把基因的名称及物种来源在NCBI数据库里查找到其GENEBANK的相关资料，包括CDS,mRNA序列，内含子数量及位置，外显子数量及位置，根据这些信息设计引物。提取酵母RNA，通过反转录得到cDNA，然后用设计好的引物进行PCR扩增，得到目的基因CDS全长。设计引物的时候要考虑加进去酶切位点，为下一步的克隆做好准备
第二 选择一个适合真核表达的载体，如PCMV之类的。然后将第一步中得到的目的基因装入载体。转化进DH-5a之类的感受态细胞中。通过抗生素筛选出已连入目的基因的载体菌株。扩培，抽提得到含目的基因的载体质粒。
第三 选择一株适当的人细胞，什么细胞就要看研究的目的了，相信你的导师会帮你解决的。
然后将第二步中的载体质粒通过瞬转或者稳转的方式转化进细胞，同时设置一系列的对照细胞株，如不转化质粒，或者转化空质粒。
第四 将培养好的细胞
1.抽提蛋白，建议用WB的方法检测目的蛋白，什么蛋白就买什么抗体。如果没掌握WB技术，可以用ELISA检测。
2.RT-PCR检测mRNA中目的基因的表达量是否有变化
这样说得够仔细了吧？
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哥哥啊！你也是06生工的吧！不知道你是哪位居然来这里问题高手佩服佩服！细胞生物学老师非气死不可！还有你那悬赏只有10啊！给20我帮你解决！全部！还有奉劝你不要用我上面给你的大幅我说的是二楼的！和我一样算你作弊知道不！早知道不告诉你好了我查资料也不容易别全部抄袭啊！否则你我都是0分！...
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哥哥啊！你也是06生工的吧！不知道你是哪位居然来这里问题高手佩服佩服！细胞生物学老师非气死不可！还有你那悬赏只有10啊！给20我帮你解决！全部！还有奉劝你不要用我上面给你的大幅我说的是二楼的！和我一样算你作弊知道不！早知道不告诉你好了我查资料也不容易别全部抄袭啊！否则你我都是0分！
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