PCR后进行DNA电泳跑的条带是一条,但不是我想要的条带,是怎么回事啊?

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/04/28 14:02:59

PCR后进行DNA电泳跑的条带是一条,但不是我想要的条带,是怎么回事啊?
PCR后进行DNA电泳跑的条带是一条,但不是我想要的条带,是怎么回事啊?

PCR后进行DNA电泳跑的条带是一条,但不是我想要的条带,是怎么回事啊?
你的结果上的“一条带”位置在哪里?我想你能确定不是目的带的话,那应该结果显示的条带比较靠前,DNA长度较小.
那很有可能是引物二聚体.出现这个情况,可能的原因有3:
1.引物本身不对,不是目的DNA扩增需要的引物.
2.DNA回收提纯的问题
3.PCR体系内镁离子浓度问题.
建议排查下各项.

首先,你是怎么确认不是你要的条带?有没有marker?marker有时候也靠不住,最好是有阳性条带作为对照,胶的浓度对同分子量的不同物质的迁移率有影响,所以不要太相信marker。
如果确认无误不是目的条带,鉴于你只有一个条带,这就不是什么非特异扩增的问题,而是你引物设计的时候就不对了。...

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首先,你是怎么确认不是你要的条带?有没有marker?marker有时候也靠不住,最好是有阳性条带作为对照,胶的浓度对同分子量的不同物质的迁移率有影响,所以不要太相信marker。
如果确认无误不是目的条带,鉴于你只有一个条带,这就不是什么非特异扩增的问题,而是你引物设计的时候就不对了。

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出现的是非特异性条带,可以调整退火温度试试看,不行的话就是引物没设计好。

测序吧,你的理论大小和实际大小存在偏差的。

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