用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/04/30 15:25:34

用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎
用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?
如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎样处理才好?我上次做的时候就挑去单菌落（猪链球菌2型）溶30微升水后用95°处理10min,然后取了5微升做模板加到PCR体系里去了,做完PCR跑胶检测的时候没有带,我觉得是我在处理模板的时候没处理好导致的,因为其他试剂都是刚买的,请各位有经验的指点一下我这个新手,步骤最好说的详细一些,

用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎
为什么不抽基因组?抽出来的模板你可以用好多次.煮沸法模板有效期短,提取的效率也很低下,干扰PCR的杂质也多.就像你PCR失败一样,不一定是模板中没有DNA,也可能是杂质干扰的结果.
如果样本只是一个菌,或者不是很多,建议少量提取基因组,这样的模板是不会有问题的.至少,包括我在内我所有见过的做过这个实验的人都没有失败过.
如果样本很多,非得要煮沸法的话你这样做：
不要用PCR仪95℃处理,用液体培养基离心获得菌体,除去培养基,无菌水悬浮,沸水浴30min,迅速-20℃冰冻,化冻后8000rpm离心以沉淀细胞碎片,取2μL上清作为PCR模板.
如果你非要用PCR仪处理,也行,37℃溶菌酶预处理30min.
如果我说的你都不想做,那么请把你的模板用量减少到2μL（我指的是对于50μLPCR体系来说）,说不定是杂质太多导致你PCR失败.

用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带. 什么是菌落pcr假阳性关于菌落pcr我的做法是：用枪头挑选单菌落到装有10uL水的pcr管中,然后悬浮菌液. 在做 PCR 时,吸取 2uL 做摸板,但电泳检测后,选有阳性克隆相对的菌液 8uL 与试管的液体培养基中培养.这样做, 菌落PCR怎么做有人用菌落做过PCR吗,假阳性高吗,效果怎么样啊革兰氏阳性菌菌落PCR问题我最近也在做菌落PCR验证,我是直接挑单菌落进行PCR验证的,但是电泳不出现条带,胶孔里有明亮物质,100bp处有很多模糊的亮色物,我是一个新手,还望您指教一下,我这种菌株菌粉可以直接做菌落PCR么?购买的标准菌株粉末可以直接至于50ulTE溶液,95度热处理5分钟,作为PCR模板么?为什么我扩增不出来目的片段呢?是因为革兰氏阳性菌的细胞壁太厚么?如果是我应该单菌落菌液PCR检测请问转化的单菌落如何用菌液PCR检测? 菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带? 菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来,这是不是说明质粒跑到菌液去了?取菌扩大培养又可以明显看到菌扩增了? PCR DNA提取试剂盒使用问题我买的试剂盒说明书上面分别列出了革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的操作方法,而我做的目标菌种为产甲烷细菌,既有革兰氏阴性菌又有阳性菌,应该按照哪种方法处理【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 【求助】菌落PCR有目的条带与菌液PCR却什么都没有? 微生物检测中,做细菌霉菌检测时是否要做阳性菌的阳性对照菌落PCR做了10次还是不成功···我是第一次做菌落PCR,但是做了10次都没成功···用菌是JM83菌,在平板上培养成菌落的,做的时候就挑一点菌进体系中.我的体系是 mix 混合液（里面包含了dNTP、buff 饮用水菌落数超标一般怎样处理为什么蓝白筛选时,筛选出的白色菌落要将进一步鉴定?哪些方法能确认阳性克隆?为什么白色菌斑还要鉴定怎样设置PCR的阳性对照和阴性对照