为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/12 12:10:37

为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是
为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截
缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是少了一截

为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是
请检查以下几点
1.PCR扩增的延伸时间是否足够
2.连接前回收片段是否是目的片段
3.克隆后是否进行菌液PCR鉴定大小符合目的片段
4.测序是否采用双向测序

适当延长一下连接的时间,还有测序前,进行一下菌落PCR检测,看看片段大小我连16度连接了12h以上,菌落pcr一开始认为只要是p出来就可以送测序了,测了一次结果短了。后面就菌落pcr看了看大小,确实片段是小了。就是不明白为什么会小了,找不到为什么短了一截的原因,按理说t载体克隆个1.5k 的片段应该是挺简单的啊,为什么我重复了几次都是在一端短了,而且每次短的都不一样...

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适当延长一下连接的时间,还有测序前,进行一下菌落PCR检测,看看片段大小

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你就测了一个方向的吧,要双向测然后拼接起来就OK了。你的片段比较长,测序一般是测双向在拼接起来就是完整的序列了

为什么我将一个1.5kb的基因克隆到T载体上,送去测序总是少了一截呢,每次都是少了下游引物的那一截缺失的片段大小还不一样,这个基因我用引物扩下来的时候是正常的.连到T载体,测序就总是 为什么要进行亚克隆?一个基因已经克隆到T载体上了,想表达它,为什么还要进行亚克隆,连到pET40b呢 基因定位搜索一个人类疾病基因被定位在7号染色体一段140kb的区域内,并已分离到此染色体区段的克隆,但并不知道该基因定位在此区域的哪一位置.用什么方法可以找到该基因? 克隆到一个与癌症发生有关的基因,如何研究它是原癌基因音还是抑癌基因 请问各位专家克隆3kb的基因,用什么样的载体 设计一个基因克隆的实验方案 基因克隆的步骤 基因克隆和序列分析相关问题我扩增产物为1300到1400bp,将产物送交公司测序两次了,每次只有一个反应成功,仅测了800到900bp,急!我将这一个反应的结果与genebank上查到的序列对比,同源性只有34%! DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量 怎样克隆一个目的基因? 设计一个实验进行特定基因的克隆测序 pMD-19T是由puc19改造而来的,就是在多克隆位点处插入了一个Ecor V酶切位点,为什么就不能用于表达外源基为什么就不能表达外源基因了? 原癌基因与抑癌基因的实验检测方法克隆到一个新基因,与癌症发生有关,请设计实验确认是属于原癌基因还是抑癌基因,说明理由. 怎样克隆基因或是克隆基因的一般步骤是什么? 建立一个基因文库后,如何鉴定一个携带目的基因的克隆. 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 如何从一个表达基因文库中克隆某个已纯化的蛋白质基因 细胞毒性T细胞分裂形成一个克隆 为什么对