固体培养基是用来对微生物分离和计数的,那么,请问同仁朋友们,该过程是怎样操作的?

固体培养基是用来对微生物分离和计数的,那么,请问同仁朋友们,该过程是怎样操作的?
固体培养基是用来对微生物分离和计数的,那么,请问同仁朋友们,该过程是怎样操作的?

固体培养基是用来对微生物分离和计数的,那么,请问同仁朋友们,该过程是怎样操作的?
方法步骤：①菌悬液的制备：如果用于分离的样品是水样液体则不需此过程,即可直接作为菌悬液.固体样品如土壤、泥等,则需制备菌悬液.具体做法是：称取样品1g,放入盛有99ml无菌水的三角瓶中,震荡5分钟充分摇均,使细菌分散.这样将样品稀释成为10-2菌悬液.②稀释：接10倍稀释法把制备好的10-2菌悬液稀释到10-8（液体样品稀释到10-6）.取6支装有9ml无菌水的试管,编好号从10-3～10-8（液体样品从10-1～10-6）.用无菌移液管从10-2菌悬液中吸取1ml,放入编号10-3的试管中（无菌操作）,用手轻压移液管上的橡皮头吸吹三次（吸入时一次比一次液面高）,目的是将移液管中的菌悬液全部洗下并混匀,制成10-3菌液.用同一支移液管吸1ml10-3的菌液,放入编号10-4试管中混匀,重复以上操作制成10-4菌液.依此类推,直到第六管即编号10-8的试管,制成不同稀释度的菌液.③接种：难备好经灭菌的、温度为45～50℃的牛肉膏蛋白胨培养基140ml；经灭菌的培养皿（直径9cm）九套,分别标上10-6,10-7,10-8（每个稀释度三套）,即做三个重复.用经灭菌的移液管吸取1ml菌液,倒入相应编号的培养皿中,然后即可倒入培养基15ml（温度不能太高或太低,太高易把菌烫死,太低则易凝固）.倒入后立即轻轻摇动培养皿,使培养基与菌液充分混匀,立即静止,水平放置待其冷却.凝固后即制成平板.注意在培养基冷却过程中不能摇动培养皿,否则培养基表面会凹凸不平.上述过程都进行无菌操作.④培养观察：将制作的平板放入30～37℃的恒温箱中培养1～2天.通过培养,即可见平板上长出各种不同的菌落.选择所需要的单个菌落,接种到斜面培养基上进一步培养后,进行镜检,如无杂菌,即成为纯种；如有杂菌,可再稀释分离,直到纯种.稀释分离方法总结.（2）平板画线法：分离纯化菌种最常用的方法.主要依据是,通过用接种环连续画线的移动过程中,使混杂的细菌分散开,经过培养,分散的单个细菌繁殖成单个菌落.制作平板方法同稀释法,但是必须提前倒好,充分冷却后方可使用；并且表面必需光滑,厚薄均匀；培养基用量要比稀释法厚一些,每皿约20ml左右.接种使用接种环沾取待分离的混杂菌液（或固体培养基上的菌体少许）,然后在平板表面一侧作第一次平行画线（无菌操作）,画线占培养皿总面积的1/3即可.第一次画线完成后,左手把平板转动70°角.第二次画线是用接种环划过第一次画线部分,即是把第一次划在平板上的菌液作为菌源,画线方法与面积同第一次.然后再转动70°角,灼烧接种环后做第三次画线.画线时注意不要把培养基划破,最后一次平行画线不要与第一次画线相接,否则达不到分离的目的.几种常用画线方式：画线完毕后,将平板倒置于恒温箱中培养,待长出菌落后进行观察,方法同稀释法.2.细菌的计数：除了对细菌进行观察外,有时还要调查各种样品中的细菌数量.如对水污染程度的调查、水质标准的调查及食品卫生的检查等.细菌的计数方法一般有显微计数法和菌落平板计数法.（1）显微计数法：利用血球计数器在显微镜下直接计数,是常用的计数方法.血球计数器是一块特制的载玻片,载玻片上有四条槽而构成三个平台.中间的平台较宽,而且被一短横槽隔成两半,两个半边上各刻有一个方格网.每个方格网分成9个大格,中央的大格是计数室.计数室的刻度有两种：一种是由25大格组成,每个大格又分成16个小格,25×16=400小格；另一种是由16大格组成,每个大格又分成25个小格,16×25=400小格.两种的总体积均为0.1mm3.计数器的构造如图4-5和图4-6所示.计数方法：25×16的计数器,显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个大格,即5×16=80小方格的细菌数.若80小格的细菌数为A,则每毫升菌液的含菌量=A×400/80×10×1000=50000A；16×25的计数器,显微镜下数左上、右上、左下、右下共四个大格,即4×25=100个小格的细菌数.若100小格的总菌数为A,则每毫升菌液的含菌量=A×400/100×10×1000=40000A.（2）平板菌落计数法：因为每个活的细菌在平板上繁殖都能形成一个菌落,即平板上的菌落数等于接入平板的活菌数.如果待测的样品细菌稀少（如自来水）,则可以直接接种到培养基,制成平板.但许多样品细菌的密度都很大,为使计数准确,首先应将待测样品稀释成不同稀释度的菌液.再取一定稀释度、一定量的菌液,接种到培养皿中,制成平板.经培养后,统计菌落数目,即可计算出样品中的含菌数.具体操作同稀释分离方法.计数时,按下列公式计算：每毫升菌液的活菌数=同一稀释度3次重复的菌落平均数×稀释倍数×5.