关于TA克隆测序结果的几个问题,用的是PMD19-T Vector.1 怎样看是否连接成功?2 有的序列是用F测定的,有的是用R测的,怎样调到一个方向比对?谢谢啦!

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/13 05:06:42

关于TA克隆测序结果的几个问题,用的是PMD19-T Vector.1 怎样看是否连接成功?2 有的序列是用F测定的,有的是用R测的,怎样调到一个方向比对?谢谢啦!
关于TA克隆测序结果的几个问题,用的是PMD19-T Vector.
1 怎样看是否连接成功?
2 有的序列是用F测定的,有的是用R测的,怎样调到一个方向比对?
谢谢啦!

关于TA克隆测序结果的几个问题,用的是PMD19-T Vector.1 怎样看是否连接成功?2 有的序列是用F测定的,有的是用R测的,怎样调到一个方向比对?谢谢啦!
1.直接用F或R测序,看有没有插入片段；或拿载体两端的特定的限制性酶切一下质粒,看有没有片段切出来；
2.用生物学软件比如DNAMAN等得到反向互补序列,再比对,

1.先用载体上的引物和序列中的任意一个引物，看PCR产物是否正确，最准确的是酶切产物，然后测序看是否连接成功。
2.你选取质粒同侧的引物如T7或M13与一个F-primer就OK了。。。

首先测序回来后与目的片段进行比对，没有片段出入就是空载。或者直接用拼接软件进行对比。至于方向1500以内的拼接后完整比对即可或者您把其中一个方向进行反向互补就可以。

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