酶切不出来,是怎么回事?转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后,

来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/05/08 10:04:24

酶切不出来,是怎么回事?转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后,
酶切不出来,是怎么回事?
转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后,再做了个酶切鉴定,但电泳发现没切不开.这是怎么回事啊?

酶切不出来,是怎么回事?转化涂板挑菌后,摇菌6-8h后,我用先前目的片段的引物,做了个菌液PCR,电泳后表明目的片段从菌液中扩出来了,这个应该说明目的片段连接到载体中了的,但我提出质粒后,
用的是哪两个酶?
可能酶切位点甲基化.
PCR验证假阳性的可能性也有.

这说明你的酶切体系可能有问题,需要优化一下。

有没有用提的质粒做PCR?也许你的菌液PCR是假阳性