作业帮一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?
来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/30 05:20:03
一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?
一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?
一对引物扩增条带竟然有两条,除了非特异性扩增的可能还有别的原因么?大家有没遇到这种情况啊?
应该是非特异扩增了,但是非特异扩增也分好几种情况呢,首先要看你的扩增产物是非常特异的两条带还是出了两条较为明显的还有其他杂带,如果是前者,那么很可能是由于你的引物在模板上不止有一个结合位点造成的,这种情况下你需要做的就是重新设计引物并合成,重新进行扩增；如果是后者,那么由扩增条件不适合造成非特异扩增的可能性大一些,这个时候你就需要重新摸索扩增条件,一般扩增体系内模板,引物,或者mg2+加多了会造成多条扩增产物的出现,而对PCR来讲影响最大的莫过于引物的退火温度,提高退火温度可以有效的减少非特异扩增.
从目前你的情况来看,建议你先尝试提高退火温度,减少模板用量,如果都不管用,只好重新设计引物来试试了~祝好运
1 非特异性扩增。
2 模板有重复序列。
3 模板中DNA具有序列长度多态。
这种情况很正常的，我有时候有三条以上的非特异条带，除了目的条带，其他的就是非特异的条带的嘛，这个可以通过调节PCR条件来改善的
你先确定非特异的那条是比目的条带长还是短？长的话，改变PCR扩增条件，可以考虑缩短退火和延伸时间；短的话提高退火温度。
顺便说一下，如果你是RT-PCR的话可能是你的引物设计的时候没有跨在2个外显子上，导致PCR拉出了基因组含内含子的片段...
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这种情况很正常的，我有时候有三条以上的非特异条带，除了目的条带，其他的就是非特异的条带的嘛，这个可以通过调节PCR条件来改善的
你先确定非特异的那条是比目的条带长还是短？长的话，改变PCR扩增条件，可以考虑缩短退火和延伸时间；短的话提高退火温度。
顺便说一下，如果你是RT-PCR的话可能是你的引物设计的时候没有跨在2个外显子上，导致PCR拉出了基因组含内含子的片段
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