PCR产物直接测序的原理

来源：学生作业帮助网编辑：作业帮时间：2024/05/06 04:07:40

PCR产物直接测序的原理
PCR产物直接测序的原理

PCR产物直接测序的原理
原理：
是来至于双脱氧链终止法——现在应用最多的核酸测序技术,由Sanger等1977年提出：
模板经过测序PCR反应后形成3'末端带有荧光标记（早期用同位素标记）的相差一个碱基的不同长度的产物,再根据每段DNA产物的电泳速度来检测整段DNA的序列.
以上——手打——希望对你有帮助
优点：
一是操作易于标准化与自动化,因为它是一个单一的酶的反应过程,不依赖于生物体；
二是通过一次测序反应就能确定样品中某个等位基因的顺序,而PCR产物克隆后测序时,样品顺序要在测定了数个克隆片段之后才能确定.因为只有这样,才能区别突变是基因组本来就有的,还是由于Tag聚合酶在PCR过程中错误掺入核苷酸引起的.

没法直接测序吧怎么也得连个T载体才能测啊

目前常用的方法是连到T载体上这样可以用通用引物。如果直接测序的话（最少得纯化一下，脱盐等），可以用你自己的引物（做PCR时用的）。

PCR产物测序原理也是基于双脱氧核糖核苷终止法。只不过测序用的引物就是你自己做PCR时的引物。用PCR产物直接测序缺陷是两端靠近引物的序列容易测不准，因此想获得PCR产物全序列测序的话还是要链接到载体上测序为好。

PCR产物直接测序的原理 PCR产物测序过短的PCR产物为什么不适于直接测序? 为什么我们进行16S rDNA测序时,要将扩增产物导入的细菌中,而不直接对纯化后的PCR产物直接测序? PCR产物的纯化方式有哪几种?是用于测序的PCR产物， 10kb pcr产物测序如何对10kb的pcr产物测序? PCR产物可以直接测序吗 PCR产物电泳试验原理请问,把PCR产物拿去生物公司测序的问题是不是也是先要将PCR产物DNA连到载体上,再用载体的通用引物测序?应该不是吧……这个应该属于克隆测序吧?PCR产物直接测序是否就是直接用你给他的引如果PCR产物可以直接用来测序,但为什么还需要买PCR产物纯化试剂盒,还要进行连接转化提质粒酶切?我的实验是在PCR产物电泳后发现有自己所需要的长度的目的片段.如果直接测序和经过连接转 PCR产物测序问题用PCR产物直接测序,PCR产物是1200bp左右,但是测出来只有1000bp,请问为什么少了这么多序列呢,我是新手,刚开始做,很多不懂得,望请指教, PCR片段直接测序和PCR片段经克隆后测序的结果有何区别? 是做基因克隆还是pcr产物直接测序?我从某植物转录组测序结果中找到一个基因序列,结果预测是有完整ORF的,但我在orf两侧设计引物pcr产物直接测序,多次测序的结果在orf两端的序列都不同,orf 重叠PCR的原理SOE-PCR原理我loading buffer直接加到PCR产物中了,不知道影不影响PCR产物直接纯化PCR产物出来后直接加了loading buffer,然后取5ul走的电泳,剩余的PCR产物含有loading buffer,不知道能不能直接用PCR纯化试剂盒纯化,l tail-pcr产物测序问题tail-pcr第三轮产物如果较大,比如3个KB,我想分两段测序,怎么设计中间的引物啊, pcr产物不纯化直接酶切连接可以吗?PCR反应的buffer会不会对酶产生影响哦~ PCR产物作为模板继续PCR反应,稀释前后产物不同,怎么回事?A、B均为一次PCR产物再次PCR的条带,A为直接一次PCR产物作为模板,B为稀释100倍后.图中mark为DL10000,一次PCR产物大小1400bp,A的条带与模板大