质粒双酶切质粒大小正确,菌落PCR,也有条带,但是双酶切就是不成功,有什么建议吗?

质粒双酶切质粒大小正确,菌落PCR,也有条带,但是双酶切就是不成功,有什么建议吗? 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 菌落PCR有带,可提取的质粒没带!请问我转化的单菌落做菌落PCR有带,单相对应的菌落提取质粒P不出带是什么原因呀?引物是特异性的! 为什么每次做转化后菌落PCR有带,但是提质粒后就P不出. （鉴定质粒表达）比较菌落PCR和提质粒酶切这两种方法的优缺点,为什么需要两次鉴定? 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 重组质粒鉴定pcr没条带,酶切有条带我有两种重组质粒,两个基因片段大小一样,我的重组质粒都与空质粒大小相差300左右,但是用0.9%的胶140v电泳,无法区分大小,重组质粒进行双酶切,都出现了疑 菌液PCR有条带,但提不出质粒,为什么? 质粒DNA的转化实验中在含Amp的选择性培养基上出现菌落,但阴性对照也有菌落出现,这说明什么?原因是什么 质粒转化大肠杆菌后涂平板长出的菌落出现较规则的大小两种菌落 可以继续进行质粒提取吗? 菌落PCR技术鉴定阳性重组菌落PCR扩增的序列是环状的质粒,还是线性的质粒呢?那载体通用引物是什么呢?用它扩增的是哪段序列呢? PCR产物为什么会出现100~200bp的条带我用菌落PCR检测library质粒扩增质量,引物用的是takara的M13正反引物,目的质粒基因长度为~500bp.PCR完后电泳图谱显示~750bp有较明显条带,很奇怪的就是100~200bp有 为什么大肠杆菌经过质粒转化后铺板后生长的菌落大小不一致,而且是有规律的出现两种大小不一样的形态. 我的片段转入ppicza载体后转化到DH5a里,菌落PCR验证成功,为何就是提不出质粒? 双酶切连接后转化,长出了菌落,但提质粒跑电泳,分子量比目的质粒大很多,为什么 酶切后PCR一条带都没有 但原质粒PCR有条带 为什么做MUCIN基因 从扩增、 切胶纯化、 加A 、T载体链接、 转入感受态 到挑克隆鉴定出阳性克隆 最后提质粒 取一部分提出的质粒双酶切 质粒与酶 质粒和Ti质粒有什么不同? 我有一个质粒,大小5.3k,设计的一对引物有18bp的同源区,做反向pcr来矫正这个质粒上的某个突变位点,但总