引物退火温度梯度实验怎么做

引物退火温度梯度实验怎么做 假设我有一个引物,上游引物Tm为65.2℃,下游为64.6℃.请问怎样设计退火温度梯度, 上下游引物退火温度分别为47、49℃,如何设置温度梯度PCR最合适引物退火温度低（上下游分别为47、49）,P不出目的条带 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? ISSR-PCR引物的退火温度问题我做ISSR-PCR引物的退火温度能不能直接使用primer5.0这个软件计算得出的退火温度.理论上来说这是最佳的退火温度吗? ssr引物筛选我是做分子标记的,现在遇到一些问题?1、根据引物报告单上的退火温度,上游和下游温度不一样怎么选择?2、我有600对引物,3个亲本,现在要筛一遍,用96孔的PCR板P的时候,每一对退火 在引物设计时,长度超过25bp时,其PCR退火温度怎么确定? 如何提高引物扩增的特异性现在合成了几对引物,要把一个基因扩出来,怎么提高特异性?升高PCR的温度了,做了8个温度梯度,跑电泳,最高温没有条带,最低温很多条带,中间的其次,请问是不该降低 CTAB提取植物病原真菌的DNAPCR退火时间随机引物 实验第一次的退火时间是37摄氏度 但跑胶结果什么都没有看到 引物ITSR/F退火温度是多少?急 我在扩一基因的全长,设计的一对特异引物退火温度一个47度,一个64度,我该怎么确定退火温度? 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? pcr引物退火温度55度时不行,58度可以,为什么在做PCR时,引物用55度的退火温度扩不出来,而用58度却扩出来了,为什么 【跪求】我的PCR体系应该怎么设定?退火温度?我做一种真菌的pcr,引物序列左：aatcgacccgtttccgcctt, 右：gttagattgaccgcgattcc,生工合成单给的退火温度分别是59.85和57.8我的25微升体 退火温度低会对PCR产生什么影响?我做菌落PCR,使用一个特异性上游引物和一个T7下游通用引物,退火温度用的是较低的48度,但引物的Tm分别为57,71,阳性对照都没有出结果,请问是怎么回事呢?退火 关于细菌基因组PCR的问题向做过细菌PCR的请教：体系一般都是多少,退火温度呢我们做过退火温度有48度、43度、56度,引物是通用引物1492R和27F,模板和引物都没问题,是不是引物和模板不匹配,10 做PCR时,怎么设计引物?